Cistanchis Tubulosa 추출물은 건강한 식품에서 안전합니까?

Cistanchetubulosa는Cistanchetubulosa(Schrenk다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다다.)의 비늘잎으로 말린 육질 줄기입니다.R. Wight, 다년생 기생 허브 [1].(영어) Cistanche tubulosa (독일어)R. 와이트 (R. Wight)는 다년생 기생 허브 [1]이다.신장과 양기를 보양하고 진액과 혈액을 이롭게 하며 장을 촉촉하게하고 설사약 [2] 등의 효능이 있어'사막의 인삼'이라고도 한다.현대의 약리학적 연구에서도 신장 기능 개선, 피로 방지, 혈압 저하, 노화 방지, 면역 기능 조절 등의 다양한 약리학적 효과가 있음이 밝혀졌다 [3-4].

Cistanchis tubulosa놀라운 약리학적 활동으로 인해 신장에서 사용 된 오랜 역사를 가지고 있습니다.2005년에는 일본 '년, 보건복지부 (MHLW) 가 식품 신청을 승인했다.관련 건강 식품 제품의 개발은 응용 가치가 높습니다.Cistanchis tubulosa 추출물은 건강한 식품을위한 안전한 원료이며, 그 안전성과 소비 선량은 얼마입니까?

본 연구에서는 Cistanchis tubulosa 추출물의 급성경구독성시험, A-mes 시험, 생쥐 골수 다형성 적혈구 미핵구 시험, 생쥐 정자 기형도 시험, 기형도 시험 등을 통해 안전성을 평가하여 개발 및 적용에 적절한 과학적 근거를 제공하고자 하였다.

1.재료 및 방법 Materials and Methods

MajorInstruments, 장비 1.1 및시 약

MD200-3 상부접시전자대차, 전자중량계, CXA 올림푸스 이중동공현미경, XTL-I 형 연속줌입체 현미경, 500 파라핀 로터리 슬라이서, TS-12H 생물조직 자동탈수기, BM-VI 생물조직 동결 및 내장기, LEIT220 현미경, riad BC-3000 헤마토크리트 분석기, riad BC-2800Vet 헤마토크리트 분석기, Roche-400자동생화학.혈구 분석기, Myers BC-2800Vet 혈구 분석기, Roche-400자동 생화학.

1. 2 방법

1.2.1 급성경구독성시험

쿤밍의 생쥐 20 마리 품종, 체격 18~22 g, 반은 수컷, 반은 암컷.Cistanchis tubulosa 추출물 25 g의 무게를 측정하고 멸균 증류수를 100 mL로 첨가한 다음 추출물을 20 mL/kg-bw의 비율로 3h 간격으로 두 번 생쥐에 투여하였다.위가담 후 생쥐를 14d에 대해 지속적으로 관찰하여 독성 및 사망을 기록하였다.

1.2.2 마우스 골수 다혈구증 (Polycythemia Vera, PCE)의 미핵핵검사

체격 25~30 g인 쿤밍 품종의 쥐 50 마리를 무작위로 반은 수컷, 반은 암컷 5 집단으로 나누었다.경구 가배지 방법은 24h 간격으로 2회 사용하였으며, Cistanchis 투여 추출물 (1.5, 3.0, 6.0 g/kg-bw), 음성 대조군 (멸균 증류수) 및 양성 대조군 (40mL/kg-bw cyclophosphamide, 10mL/kg-bw 복강 내 주사)을 저용량, 중용량, 고용량으로 설정하였다.

 해당 동물들은 마지막 시험물질 투여 후 자궁경부 탈구 6h로 죽었으며, 통상적인 시료 채취 및 1만 개의 절편을 준비하였다.각 생쥐에서 1,000개의 골수 다형성 적혈구를 계산하였고, 미핵이 포함된 다형성 적혈구의 수를 관찰하였으며, 200개의 다형성 적혈구를 계산하였고, 다형성 적혈구 수와 성숙된 적혈구 (PCE/RBC)의 비율을 관찰하였으며, 미핵의 비율을 미핵의 비율 (미핵율)로 계산하였다.Micronucleus rate (곱) = (micronuclei/total polycytophilic erythrocytes) × 100%이다.

1.2.3 마우스 정자 기형 검사

체적이 26~33 g인 수컷 청정등급 쿤밍품종 쥐 25 마리를 무작위로 5개 그룹으로 나누었다.시험물질의 양, 용액 조제와 가반액은 미핵검사와 동일하였으며, 양성대조구 (45 mL/kg-bw cyclophosphamide)를 1일 1회 11.25 mL/kg-bw로 5회 연속 d. 마지막 시험물질 투여 30일 후, 양성대조구를 11.25 mL/kg-bw로 복강내에 주사하였다.시험물질의 마지막 투여 30일 후 동물을 사멸시켰으며, 구조가 완전한 정자 5000 마리를 고환의 여과액에 세어 호오신을 착색하고 이상정자 발생률 (%)을 계산하였다.이상정자발생률 (%) = (이상정자수/총정자수) × 100%입니다.

1.2.4 에 임 스 테스트

Ames test는 Salmonella typhimurium histidine-deficient 균주인 TA97, TA98, TA100, TA102와 polychlorinated biphenyl (PCB)-induced rat liver microsomal enzyme (S9)으로 실시하였다.5개의 투여군 (0.008, 0.040, 0.200, 1.000, 5.000 mg/dish), 자연반웅군, 용매조절 (증류수) 군, 양성조절 (돌연변이) 군이 있었다.긍정적인 에이전트:-S9:TA97와 TA98은 2, 4, 7-trinitrofentanone (0. 2 μ g/접시), TA100었아지 드 화 나트륨 (1. 5 μ g/접시), 그리고 TA102 mitomycin었C (4 μ g/접시) 입니다.+ S9:TA97, TA98와 TA100 2-aminophene (10 μ g/접시), 그리고 TA102 1었고, 8-dihydroxyanthraquinone (50 μ g/접시) 입니다.각 그룹에서 revertant 군체의 수의 변화를 관찰한다.

기형성 테스트 1.2.5

청결 등급 SD 암컷 쥐 100 마리, 체구 208~380 g, 수컷 쥐 60 마리, 체구 302~450 g, 짝짓기 비율은 암수 2:1.

각 군별 임신한 쥐 12 마리를 임신 7일부터 16일까지의 Cistanchis tubiflora 추출물을 0.25, 0.50 및 1.00 g/kg-bw의 용량으로 투여하고, 각 군별로 10 mL/kg-bw로 gavaged 하였으며, 용매조절은 증류수였다.임신 20일째에 자궁을 절개하여 무게를 재고, 사산 및 살아있는 태아의 수를 기록하고 검사하였으며, 태아의 체질과 길이를 기록하고 태아의 생김새를 관찰하여 이상이 있는지 검사하였다.태아의 50%는 골격 검사를 받았고, 나머지 50%는 내장 검사를 받았다.

1.3 통계 처리

자료는 PEMS3.1For Win-dows를 이용하여 변환하여 통계적으로 분석하였다.자료의 분산이 일치한다고 판단되는 경우 전체비교를 위해 일원분산분석 (one-way ANOVA)을 이용하였으며, Dunnett's 검정을 이용하여 분산이 일치하는 것으로 확인되면 복용군과 대조군을 비교하였다.분산이 균질하지 않은 경우 대신 비모수 (순위합 검정) 가 사용되었습니다.카운트 데이터에 카이-제곱 검정이 사용되었습니다.마우스 골수 다색성 적혈구 미핵검사 및 마우스 정자이상검사는 Poisson&에 따라 시행하였다#39; s 분포를 테스트 한 수준의 α = 0. 05.그 시험 수준은 α = 0. 05.

2.결과

2.급성경구독성시험 1 

10 g/kg-bw의 용량으로 gavage 후, 14 d에 대한 부작용 소견은 관찰되지 않았으며, 중독의 뚜렷한 증상도 없었고 사망도 없었다.주요 장기에 대한 해부학적 검사에서는 유의한 비정상적 변화는 보이지 않았다.암수 생쥐 모두에서 급성경구독성시험에서 최대허용용량 (MTD)은 >10 g/kg-bw 이었다.Cistanchis tubulosa의 추출물은 실질적으로 비 독성 등급입니다.

2. 2 마우스 골수 다형성 적혈구 미핵구 검사

gavage 후, 남녀 투약군 모두에서 마우스의 골수미핵률은 유의한 변화가 없었으며 (조사된 PCEs 수는 5000개), 각 투약군의 적혈구성 미핵률과 음성 대조군의 적혈구성 미핵률 차이는 통계적으로 유의하지 않았다 (p>0.05), 반면 양성 대조군의 미핵종 비율이 음성 대조군보다 높았으며 통계적으로 유의한 차이를 보였다 (P <0.01), 즉 Cistanches 결핵의 미핵검사 결과는 음성이었다.Cistanche tubiflora 추출물에 대한 미핵종 검사 결과는 표 1에 나타낸 바와 같이 음성이었다.

2.생쥐에서 3가지 정자 기형 테스트

수컷 생쥐의 정자 이상률은 각 투여군별로 유의하게 변화되지 않았으며, 음성 대조군의 정자 이상률과 비교할 때 통계적으로 유의하지 않았다 (p>0.05), 반면 양성 대조군의 정자 이상률이 음성 대조군에 비해 높았으며 그 차이는 통계적으로 유의하였다 (P <0. 01)이다.그 차이는 통계적으로 유의하였다 (P <0.01)로 표시하였으며, 표 2에 나타낸 바와 같이 시스탄치스투불로사 추출물이 생쥐의 정자에 어떠한 이상효과도 일으키지 않음을 나타내었다.

2.4 Ames 테스트   

각 투여군의 돌연변이 군집 수는 자연 돌연변이 군집 수의 2배를 넘지 않았고, 투여 반사 관계도 없었던 반면, 양성 대조군의 자연 돌연변이 군집 수는 자연 돌연변이 군집보다 유의하게 많았다.따라서 표 3에 나타낸 바와 같이 Salmonella typhimurium histolytic acid 결핍 균주인 TA97, TA98, TA100 및 TA1024에서는 S9의 첨가 유무에 따라 돌연변이 유발 효과를 관찰할 수 없었다.

표 1마우스 골수에서 다색성 적혈구에 대한 미핵검사 결과 (x-±s, n=5)

주:음성 대조군과 비교하여 * P <0.05.

표 2생쥐에서의 정자 기형 테스트 결과

주:음성 대조군과 비교하여 * P <0.05.

표 3Ames test의 결과 (x-±s)

2.5기형 생성 테스트

각 투여군에서 임신한 쥐와 태아의 지표 및 사산율을 대조군과 비교한 결과, 통계적으로 유의하지 않은 차이를 보였다 (p>0. 05);각 군에서 태아의 내부 장기에서는 기형이 발견되지 않았으나, 각 투여군과 대조군의 동물을 골격 검사한 결과 개별 태아의 흉골이 완전히 골화되지 않은 것으로 밝혀졌다.GB15193-2003에서 기형성 시험의 평가 기준에 따르면, 각 투여군에서는 기형성 효과가 발견되지 않았다.

3.결론

Cistanchis tubulosa 관련 제품 개발에보다 적절한 기초를 제공하기 위해 본 연구에서는 Cistanchis tubulosa 추출물의 안전성을 평가하였다.급성경구독성시험 결과 Cistanchis tubulosa 추출물은 최대허용용량 (MTD) >10 g/kg-bw;세 가지 유전독성 검사 (골수미핵검사 (BMMT), 정자이상검사 (SAT), Ames 검사 (AMT)) 결과 음성으로 나타나 시료가 돌연변이성이 없는 것으로 나타났습니다.세 가지 유전독성 시험 (골수 미핵종 시험, 정자 기형 시험, Ames 시험)의 결과는 모두 음성으로 나타나 시료가 돌연변이 유발 효과가 없는 것으로 나타났습니다.Cistanchis tubulosa 추출물은 안전성이 우수하며 건강한 음식을 개발하는 데 사용할 수 있습니다.

참조:

[1] 국가약사위원회.국민약전 ' 중화민국:Part 1 [s].2010년 판다.북경:화학공업신문, 2010:126.

[2] 호우지화, 장궈원.Cistanchiakis[J]에 대한 약리학적 연구의 진행.한의학 논문집, 2003, 9(4):3-4.

[3] 진서연, 장진룡.Cistanchiakia[J]의 화학조성의 경과.대한한의학회지 1994, 19(11):695-697.

[4] 이용, 웅유준, 지아샤오광 외.Cistanchis tubulosa 추출물이 고염분 섭취한 쥐에서 혈압, 적혈구막 유동성 및 전혈점도에 미치는 영향 [J.천연물 연구 개발, 2009, 21(5):220-222.