이상지질혈증에 흑미 추출물 효능에 대한 연구

흑미는 안토시아닌의 함량이 높아 검은색을 띤다다다.시아 등 [1]과 링 등 [2] [3]은 동물 실험 연구를 통해 그런 사실을 발견했다식이 흑미 (dietary 검은 쌀)실험동물의 혈중지질 수준을 낮추고, 동맥경화증의 발생 및 발생을 억제할 수 있으며,이 효과가 종자 외투의 안토시아닌과 관련이 있다고 추측할 수 있다.또한 흑미 추출물의 활성산소 소거 및 항산화 효과는 In vitro 화학 모사 실험에서 일부 확인되었다 [4] [5] [6] [7].그러나 흑미 추출물의 주요 활성 성분과 체내 생리활성에 대한 연구는 아직 미흡한 실정이다.

논문 연구Black Rice 추출물의 이점고지혈증 쥐에 대해 그리고 안토시아닌과 지방산의 조성과 함량을 분석한다.흑미 추출물의 안토시야노사이드와 불포화지방산은 흑미의 항산화 및 지질 저하 효과에 중요한 물질적 기반임을 추론하였다.

Ⅰ다.재료 및 공법

1.1 실험재료

1.1.1시약 및 기구

Total 항 산화capacity (TAC), glutathione peroxidase (GSH-Px) activity, malondialdehyde (MDA) content 그리고superoxide dismutase (SOD) 활동were provided by Nanjing Jianji한Bioengineering Research Institute; 총cholesterol (TC) 그리고triglycerides (TG) were provided by Beijing Zhongsheng Bioengineering Hi-Technology Company; LDL-C 그리고HDL-C were provided by Wenzhou East Biological Engineering Company. The total cholesterol (TC) 그리고triglyceride (TG) kits were provided by Beijing Zhongsheng Bioengineering Hi-Tech Company; 이low-밀도lipoprote에서cholesterol (LDL-C) 그리고high-density lipoprote에서cholesterol (HDL-C) kits were provided by Wenzhou East Biological Engineering Company. All other chemical reagents used 에서이analysis were domestic analytical pure.

흑미 추출물 1.1.2 준비

흑미 품종은 " 장진 1" 이었다지린농업과학원 벼연구소에서 재배하고 광둥농업과학원 생명공학연구소에서 제공했다." 장진 1"의 신선한 흑미(40 mesh)를 50 °C에서 60% 에탄올을 용매로 추출하고 감압하에서 농축하여 검붉은 시럽을 얻었다검은쌀peel 추출물.

…의 준비흑미 추출물증류수에 녹여 5%, 10%, 20% 용액으로 제조하여 저, 중, 고의 세 가지 BRPE 시험군의 gavage 재료로 사용하고 4 ℃에서 저장하였으며, 제조 후 2주 이내에 사용하였다.

실험동물 및 집단 1.1.3

Sixty clean-grade male SD rats, weighing 160±20 g, were provided by the Laboratory Animal Center 의Guangzhou University 의Traditional Chinese Medicine. The animals were fed 와normal feed for 1 week 을acclimatize to the environment, 그리고then blood was collected 에서the orbital ve에서plexus. According to the level 의total cholesterol, the animals were randomly divided into 5 groups: a control group, a model group, 그리고3 experimental groups 의low, medium, 그리고높은doses 의BRPE, 와12 rats in each group, 그리고were fed with 다른feeds according to the design 의the experiment, and then entered into the experimental period.

동물 먹이 및 취급 1.2

Animal feeding was completed in the clean animal laboratory 의Guangzhou University 의Traditional Chinese Medicine. All groups 의rats were housed in separate cages according to groups, except for the control group which was fed with a basal diet, the other 4 groups were fed with high fat diet (containing 85% basal diet, 10% egg yolk powder, 5% lard, 0.5% sodium cholate). During the experimental period, the control group and the model group were given 1ml/100g body weight of saline by gavage every day, and the 5%, 10%, and 20% BRPE groups were given 1ml/100g body weight of 5%, 10% and 20% BRPE, respectively, and were fed and watered ad libitum, and the amount of food consumed was recorded every 3 days. The experimental period was 8 weeks. After the experiment, the animals were fasted for 8 h, the eyes were removed to collect blood and separate the serum, which was divided and stored at -20℃ for future use. The animals were killed by the cervical dislocation method, and the livers were separated and stored at -20℃.

탐지 색인과 방법 1.3

모든 플랫폼의 혈중 지질 결정CHOD-PAP 효소법에 의한 TC, HDL-C 및 TG.혼합형 이상 직접적인 방법을 사용 하여 측정 되는, 자동 생화 학적 분석기 7060 합니다.

플라즈마 LDL의 분리, 정화, 산화 1.3.2. 

Plasma LDL was separated by density gradient centrifugation, and the LDL protein content was measured by Lowry' s 방법이다.LDL 단백질 함량은 Lowry&로 측정하였다#39;s 법, 그리고 Cu2+ oxidation [8]에 의해 LDL의 산화적 개질을 수행하였다.LDL의 순도와 산화도는 agarose gel 전기영동을 통해 확인하였고, LDL의 변형정도는 relative electrophoretic mobility (REM)로 측정하였다.전기영동 결과 ox-LDL의 REM은 1.4로 나타났다.

1.3.3 쥐 혈청에서의 Anti-ox-LDL 항체 역가 측정 

According to the instructions of the Protein DetectroTM ELISA Kit, the concentration of prepared ox-LDL and natural LDL was diluted to 10 µg protein with 1× coating solution. The prepared ox-LDL and natural LDL concentrations are diluted to 10 µg protein-ml-1 with 1× Coating Solution and incubated in the plate overnight at 4°C. The plate is washed 3 times with Wash Solution and then added to the plate with 100 µg protein-ml-1. The plate is washed 3 times with wash buffer, then secondary antibody solution diluted 1:500 with 100 µl of 1×BSA Diluent/Blocking Solution is added and incubated for 1 h at room temperature.

씻은 철저 한 후, 100 µ l의 기질를 추가 하여 해결책을 추가하고 반응이 종료 되었습니다었100 µ l의 반응 30 민과 후 종료 솔루션 효소 미터 405 nm에서 읽었다.혈청 내 anti-ox-LDL 항체의 역가는 ox-LDL의 흡광도 값에서 LDL의 흡광도 값을 뺀 값으로 표현된다 [9].

1.3.4 간 조직 균질액의 제조 및 단백질 함량 결정 

Take liver tissue and rinse it in cold saline, remove the blood, wipe it dry with filter paper, weigh it, use sterilized saline as a homogenizing medium, make 10% liver homogenate (w﹕v) at 4℃, centrifuge it at 4℃ for 15 min at 3,000g, take the supernatant into portions, store it at -20℃ and reserve it for use, and then determine the protein content with Bradford' s 방법이다.

1.3.5 혈청 및 간 총 항산화능 (TAC), SOD, GSH-Px 활성 및 MDA 함량을 측정하였다 

kit의 지침에 따라 TAC, SOD, GSH-Px 효소 활성 및 MDA를 분광광학적으로 측정하였다.

추출물의 안토시아닌 함량 측정 1.3.6

The four anthocyanosides, namely, cornflowerin-3-glucoside, cornflowerin-3,5-diglucoside, geraniolin-3,5-diglucoside and mallowin, which were purified independently and identified to meet the chromatographic purity standard were used as standards[7], and then determined by HPLC method.

지방산 함량 측정 1.3.7추출물에서 지방산 함량은 Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)로 분석한다.

1.4 데이터 처리 및 통계 분석

SPSS 10.0 software package was used for statistical analysis. Homogeneity of variances was tested for the means of multiple groups; if the variances were not homogeneous, one-way ANOVA was performed after the variables were exchanged to achieve homogeneity; the LSD method was used for the two-by-two comparisons between groups.

Ⅱ다.결과 및 분석

흑미껍질 추출물이 고지혈성 쥐의 혈중 지질에 미치는 영향 2.1

표 1은 각 군별 쥐의 지질수준을 나열한 것으로, 이를 통해 모델군과 비교하여 세 가지 BRPE 군의 혈청 TC, TG 농도가 대조군에 근접하거나 오히려 낮았으며 (P<0.05), 세 가지 BRPE 군 간에 일정 용량 효과 관계가 있고, 세 가지 BRPE 군의 HDL-C 함량이 모델군에 비해 유의적으로 높은 것을 알 수 있다 (P<0.05).세 BRPE 군 모두에서 HDL-C 수치가 모델군에 비해 유의하게 높았다 (P<0.05).또한 10%와 20% BRPE는 LDL-C 수준을 감소시킬 수 있었으나 (P<0.05), 5% BRPE는 유의한 효과가 없었다 (P>0.05).

표 1 흑미 추출물이 쥐의 혈중지질 농도에 미치는 영향 (mmol·L-1, x±s, n=12)

CG = 대조군,MG = 모형군

공통 위첨자 문자가 없는 열의 값은 P<0.05로 유의하게 다릅니다.이하 같다.

흑미 추출물이 고지혈성 쥐의 죽상경화지수에 미치는 영향 2.2

죽상경화지수 (AI)는 죽상경화증 (AS)의 위험을 반영하기 위해 혈중 지질의 여러 지표를 통합한 매개변수이며, AI 가 증가하면 AS 가능성이 증가함을 시사한다.표 2는 세 투여군의 AI1 및 AI2 값이 모델군에 비해 유의하게 낮았다 (P<0.05), 그리고 세 군간에 투여량 효과 관계가 있었다.

표 2 Effect of Black Rice Extract on Atherosclerosis Index in Rats (x ± s, n = 12)

AI1 = (TC-HDL-C)/apo , AI2 = 혼합형/apo

고지혈성 쥐에 대한 흑미 추출물의 항산화 효과 2.3

총 항산화능력 2.3.1

고지혈증이 발생하였을 때 모델군 쥐의 혈청 및 간 TAC는 대조군보다 낮았다.BRPE의 섭취는 쥐에서 TAC를 증진시켰으며, 그 중 BRPE의 저용량은 간 TAC를 증가시키는 경향이었으나 그 차이는 유의적이지 않았으나 (P>0.05), 본 실험군의 동물의 혈청 TAC는 모델 대조군에 비하여 유의적으로 증진되었다 (P<0.05).10%와 20% BRPE는 혈청 및 간 TAC를 유의적으로 향상시켰으며, 그 중 20% BRPE 군의 혈청 TAC 수치가 대조군보다 높았다.10%와 20% BRPE는 혈청 및 간 TAC를 유의적으로 증진시켰으며, 20% BRPE 군이 대조군보다 혈청 TAC 수치가 높았다 (P<0.05).

Table 3 The Effect of Black Rice Extract on the Total Antioxidant Capacity of Serum and Liver in Rats (x±s, n =12)

항산화 효소 활성 및 지질과산화 생성물 함량 2.3.2

Long-term intake of high-fat diets increased the blood lipid level of rats, decreased the activities of GSH-Px and SOD, and significantly increased the content of lipid peroxidation products (MDA) (P＜0.05). The intake of BRPE enhanced the activity of antioxidant enzymes and showed a certain quantitative effect relationship (P＜0.05). Accordingly, the MDA content of rats in the three dose groups was significantly lower than that of the model group (P<0.05), showing a significant quantitative effect relationship (Table 4).

표 4 흑미 추출물이 항산화 효소 활성 및 쥐의 혈청 및 간의 Malondialdehyde 함량에 미치는 영향 (x±s, n = 12)

져 있 Anti-ox-LDL 항체 수준

Ox-LDL은 인체를 자극하여 항체를 생성할 수 있으며, 항체 수준은 Ox-LDL의 생성을 어느 정도 반영할 수 있다.표 5에 나타난 바와 같이 LDL-C 수준의 증가와 함께 모델군의 항옥소 ldl 항체 수준이 대조군보다 유의적으로 높았으며 (P<0.05), BRPE의 섭취는 항옥소 ldl 항체 생성을 유의적으로 감소시켜 용량 의존적인 관계를 보였다.

표 5 흑미 추출물이 쥐의 혈청 항옥-ldl 항체 수준에 미치는 영향 (x±s, n =12)

표 6  흑미 추출물의 Anthocyanin 함량

2. 4 흑미 추출물의 성분 분석

안토시아닌 함량 2.4.1

4가지 안토시아닌, 즉cyanidin-3-glucoside, 흑미 추출물에서 cyanidin-3, 5-diglucoside, geranium-3,5-diglucoside, malachitin이 검출되었다.그 중 cyanidin-3-glucoside 가 가장 높은 함량을 보였고 그 다음으로 cyanidin-3, 5-diglucoside, malachitin이 가장 낮은 함량을 보였다.표 6에 나타낸 바와 같이 안토시아닌 4 종의 총 함량은 43.43 g/100g 이었다.

지방산 함량 2.4.2

The composition of fatty acids in 검은쌀extract has high unsaturated characteristics. Among the 14 detected fatty acids, 6 are unsaturated fatty acids, accounting for 87.66% of the total fatty acids. The highest proportion of fatty acids are oleic acid and linoleic acid (Table 7).

표 7 흑미 추출물의 지방산 함량

Ⅲ다.토론

3. 1에서 검은 쌀 추출의 효과는 지질 유기체의 신진대사와 Anti-Oxidative 스트레스 수준

고지혈증은 AS의 독립적인 위험인자이다.특히 LDL-C 등 지질의 수치의 증가는 AS의 발생과 직접적인 관련이 있으며 HDL-C는 콜레스테롤 역운반체 촉진과 항산화 활성 [10]으로 인해 일정한 항 AS 효과가 있다.따라서 (TC-HDL)/HDL의 값은 AS의 위험성을 어느 정도 반영할 수 있다 [11].

In the present study, the intake of 검은쌀extract was found to reduce serum TC, TG, and LDL-C levels and increase HDL-C levels in high-fat chow-fed rats, thus improving lipid metabolism and decreasing the risk of AS,with a significant quantitative dependence on the effect of intake. Studies have shown that hyperlipidemia is a major inducer of oxidative stress[12], and free radicals generated by oxidative stress further oxidize and modify LDL to form ox-LDL, which exerts a strong AS-causing effect by inducing endothelial dysfunction, promoting the phagocytosis of lipids by monocytes to form 거품cells, and facilitating the synthesis and secretion of a large number of cytokines and adhesion molecules by vascular cells[13].

In the present study, ox-LDL production was significantly reduced in rats consuming the 검은쌀extract, thereby reducing its damaging 효과on blood vessels. The decrease in ox-LDL production may be attributed to the reduction of LDL in rats by black rice peel extract, and to the enhancement of antioxidant enzymes, which scavenge the overproduced reactive oxygen radicals in the body and prevent the oxidative 수정of LDL.

3.2 흑미껍질 추출물의 항고지혈증 및 항산화 효과

In the present study, it was found that black rice extract could improve lipid metabolism, enhance the activity of antioxidant enzymes and reduce the 형성of lipid peroxidation products, thus possessing antioxidant and hypolipidemic biological activities. This result is consistent with the effects of black rice or black rice peel found by Xia et al [1] and Ling et al [2] [3].

In the present study, the black rice peel extract obtained by ethanol extraction was rich in black rice pigments and rice bran oil, and it has been confirmed that anthocyanosides are the main components of black rice pigments [14][15]. The anthocyanosides and rice bran oil have received much attention because of 그들의active physiological functions. Therefore, the present study focused on the composition and content of anthocyanosides and fatty acids in black rice extract. The results showed that the extract contained 43.43% of anthocyanosides such as cornflower-3-glucoside and 14.5% of unsaturated fatty acids such as linoleic acid.

Studies on the antioxidant activity of anthocyanosides have been widely reported, and Kano [16] et al. demonstrated that anthocyanosides contained in 보라색달콤한potato have antioxidant activity both in vivo and in vitro. Sun Ling [7] et al. and Zhang Mingwei [6] et al. found that the in vitro antioxidant activity of different black rice varieties showed a highly significant positive correlation with the total anthocyanin content of their seed coat (P < 0.01), suggesting that the antioxidant effects of black rice or its extracts are closely related to anthocyanin compounds. Therefore, anthocyanosides may be the main active substances in the antioxidant effect of black rice extracts.

The unsaturated fatty acids oleic acid and linoleic acid rich in black rice skin extract belong to the n-6 series of unsaturated fatty acids. Medical nutrition studies have shown that n-3 and n-6 series of unsaturated fatty acids play an important role in reducing blood TC and improving lipid metabolism. Allman-F et al. found that sunflower seed oil rich in oleic acid in the diet can reduce blood TC and LDL levels.

There is currently relatively little research on the effect of 안 토시아 닌 on blood lipid metabolism. Takanori et al. [18] added 보라색옥수수색소rich in cyanidin-3-glucoside to a high-fat diet and fed mice for 12 weeks. They found that compared to giving high-fat diet alone, the serum TG content of mice was significantly reduced. Yamakoshi [19] and others found that feeding 토끼with procyanidins, the prerequisite of anthocyanins, can reduce the level of LDL in rabbit blood and reduce the formation of 타plaque. Based on the research results, it is speculated that 안 토시아 닌and unsaturated fatty acids may be the main active substances in black rice extracts that exert antioxidant and lipid-lowering effects.

Ⅳ다.결론

본 연구에서 흑미 추출물의 주성분을 분석한 결과 cornflower-3-glucoside와 같은 anthocyanoside 가 43.43%, 지방산이 16.6% 함유되어 있었으며,이 중 87.66% 가 불포화지방산이었다.다양한 용량의 흑미 추출물을 투여하면 고지혈증 쥐의 혈중 지질 수준을 낮추고 체내 산화 스트레스를 개선할 수 있다.이를 통해 흑미 추출물에 함유되어 있는 안토시야노사이드와 불포화지방산을 유추할 수 있었다 were the important material basis for the antioxidant and lipid-lowering effects of black rice.

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